PCR實(shí)驗(yàn)室的原則與注意事項(xiàng)

PCR實(shí)驗(yàn)室是分子診斷的基礎(chǔ)，也是進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)的場所。實(shí)驗(yàn)室的基本知識仍然是非常重要的一環(huán)。博泰小編帶大家了解PCR實(shí)驗(yàn)室的原則與注意事項(xiàng)有哪些。

一、PCR實(shí)驗(yàn)室工作基本原則

1.進(jìn)入各工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行。

試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→ 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。

2.各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品不得混用。

3.不同的工作區(qū)域使用不同的工作服。工作人員離開各工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出。

4.實(shí)驗(yàn)室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。

5.工作結(jié)束后，必須立即對工作區(qū)進(jìn)行清潔。工作區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺表面應(yīng)當(dāng)可耐受諸如次氯酸鈉的化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實(shí)驗(yàn)臺表面的紫外照射應(yīng)當(dāng)方便有效。

6.實(shí)驗(yàn)室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序，所有操作符合《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》。

二、Pcr實(shí)驗(yàn)室的注意事項(xiàng)

1、試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)

貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能經(jīng)過擴(kuò)增檢測區(qū)，試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在該區(qū)，應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。  

2、標(biāo)本制備區(qū)

由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。

3、擴(kuò)增區(qū)

為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)當(dāng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動(dòng)。必須注意的是，所有經(jīng)過檢測的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開。

4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。